کلونینگ و بیان آنزیم درمانی اوریکاز آسپرژیلوس فلاووس در اشریشیاکلی

نویسندگان

مهدی ایمانی

m imani دانشگاه ارومیه محمد پاژنگ

m pazhang دانشگاه شهید مدنی آذربایجان شرقی تبریز سمیه میرزائی نیا

s mirzaeinia دانشگاه شهید مدنی آذربایجان شرقی تبریز

چکیده

زمینه و هدف: اوریکاز (ec 1.7.3.3) آنزیمی است که باعث کاتالیز اوریک اسید به h2o2 و الانتوئین می شود و در درمان نقرس استفاده می شود. هدف این تحقیق کلون سازی ژن سنتتیک کدکننده ی آنزیم اوریکاز آسپرژیلوس فلاوس در پلاسمید pet-28a(+) و بیان نوترکیب آن در اشریشیاکلی می باشد. روش بررسی: بعد از استخراج توالی ژنی از پایگاه داده ها، ژن کدکننده ی اوریکاز بهینه سازی شد و سنتز آن سفارش داده شد. سپس ژن سنتتیک در پلاسمید pet-28a(+) در بین آنزیم های ncoi و xhoi ساب-کلون شد و توسط روش های هضم آنزیمی، pcr و تعیین توالی کلون سازی صحیح آن تایید شد. بعد از انتقال آن به باکتری bl21 به روش شیمیایی والقا آن توسط iptg، بیان آن بهینه سازی شد. برای ارزیابی القا آنزیم نوترکیب، ژل الکتروفورز پروتئین استفاده شد. یافته ها: نتایج حاصل از هضم آنزیمی، pcr و تعیین توالی نشان داد که آنزیم اوریکاز به طور صحیح در جایگاه مورد نظر کلون سازی شده است. دمای 22 درجه ی سانتی گراد و زمان 6 ساعت با غلظت iptg 1 میلی مول برای بهینه سازی بیان آنزیم به دست آمد. نتایج الکتروفورز آنزیم نوترکیب، جرم مولکولی 5/34 کیلودالتون را برای آنزیم بیان شده نشان داد. تعیین فعالیت آنزیمی مشخص کرد که فعالیت ویژه ی آنزیم اوریکاز 69/7 واحد بر میلی گرم است و آنزیم به لحاظ عملکردی فعال است. نتیجه گیری: نتایج پژوهش حاضر نشان داد که ژن اوریکاز را می توان به آسانی در سیستم بیانی pet کلون و بیان کرد. نتایج تعیین فعالیت ویژه مشخص کرد که پروتئین آنزیمی به صورت محلول در سیتوزول اشریشیا کلی تولید شده است و از نظر کاتالیتیکی فعال است.

برای دانلود باید عضویت طلایی داشته باشید

برای دانلود متن کامل این مقاله و بیش از 32 میلیون مقاله دیگر ابتدا ثبت نام کنید

اگر عضو سایت هستید لطفا وارد حساب کاربری خود شوید

منابع مشابه

کلونینگ و بیان آنزیم درمانی اوریکاز آسپرژیلوس فلاووس در اشریشیاکلی

Background and Objective: Uricase (EC 1.7.3.3) is an enzyme which catalyses uric acid to H2O2 and alantoin and is utilized in the treatment of hyperuricemia or gout. The aim of this study was cloning of Aspergillus flavus uricase synthetic gene into pET-28(a) and its recombinant expression in E. coli Materials and Methods: The coding sequence of uricase retrieved from gene bank and once opti...

متن کامل

مهندسی آنزیم درمانی اوریکاز آسپرژیلوس فلاووس با استفاده از روش جهش‌زایی هدف‌دار

Background & Aims: As a therapeutic enzyme, Aspergillus flavus (uricase or; EC 1.7.3.3), is used for treatment of urate deposits, gout and nephropathy, hyperuricemia and tumor lysis syndrom (TLS). Despite desirable kinetic features, fragile stability of uricase limits its wide range applications. Therefore, several approaches have developed such as protein engineering and genetic manipulations ...

متن کامل

کلونینگ، بیان، خالص سازی و ارزیابی آنزیم لیزواستافین نوترکیب با استفاده از سیستم کلونینگ pBAD

Background and purpose: Staphylococcus aureus is an important nosocomial pathogen which causes some diseases such as endocarditis, osteomyelitis, pneumonia, toxic shock syndrome, and food poisoning. The excessive and inappropriate use of antibiotics in the treatment of these diseases causes resistance to many antibiotics. Lysostaphin is an effective agent in the treatment of staphylococcal infe...

متن کامل

کلونینگ، بیان و بهینه‌سازی محیط جهت بیان آنزیم فیتاز آسپرجیلوس نایجر در میزبان هانسنولا پلی‌مورفا

 سابقه و هدف:  آنزیم فیتاز‌ توانایی تبدیل فیتیک‌اسید به میواینوزیتول و فسفات معدنی را دارا می‌باشد؛ از این‌رو به صورت گسترده‌ای به عنوان یک افزودنی در غذای حیوانات تک‌ معده‌ای اضافه می‌گردد. هدف این تحقیق، کلونینگ، بیان و بهینه‌سازی محیط برای بیان آنزیم فیتاز آسپرجیلوس نایجر در میزبان هانسنولا پلی‌مورفا بود.   مواد و روش‌ها: در این تحقیق، جهت دست‌یابی به مقادیر بالای تولید پروتئین، توالی ...

متن کامل

کلونینگ، بیان ژن وتخلیص آنزیم CEL Iاندونوکلئاز از گیاه کرفس

اهداف: آنزیم I CEL یک گلیکوپروتئین گیاهی است که از گیاهان دسته کرفس استخراج می شود و اولین آنزیم یوکاریوتی است که پیوند ناجور را با یک اختصاصیت بالا در یکی از دو رشته DNA برش می دهد. هدف از این پژوهش کلون کردن ژن، بیان و تخلیص آنزیم CEL I اندونوکلئاز و بررسی عملکرد آن بر روی ژنهای جهش یافته در محیط آزمایشگاهی بوده است. مواد و روش ها: در این تحقیق از گیاه کرفس mRNA استخراج شد و سپس RT-PCR صورت گ...

متن کامل

اثر اسانس آویشن شیرازی روی آسپرژیلوس فلاووس

مقدمه: قارچ‌ها از عوامل مهم فساد مواد غذایی و تولید ترکیبات سمی به نام مایکوتوکسین‌ها هستند. عوارض جانبی ناشی از مصرف نگهدارنده‌های شیمیایی موجب متمرکز شدن تحقیقات روی استفاده از ترکیبات طبیعی به ویژه اسانس‌ها جهت جلوگیری از رشد قارچ‌ها شده است. اسانس‌ها ترکیبات طبیعی حاوی مخلوطی از اجزای ترپنیک بوده که دارای خواص ضدمیکروبی و آنتی‌اکسیدانی هستند. آویشن شیرازی یک گیاه بومی ایران بوده که اثرات مخ...

متن کامل

منابع من

با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید


عنوان ژورنال:
مجله دانشگاه علوم پزشکی زنجان

جلد ۲۴، شماره ۱۰۶، صفحات ۱۰۹-۱۲۱

میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com

copyright © 2015-2023